31 May Lipotransfectina-Protocolo transfección línea celular HepG2

Muchos sois los que nos estais preguntando sobre qué protocolo de transfección seguir con vuestras diferentes líneas celulares a la hora de transfectar con Lipotransfectina.

Estas son nuestras recomendaciones específicas para este tipo de células HepG2. Las condiciones óptimas para sus aplicaciones tienen que ser determinadas experimentalmente, porque al igual que otros agentes de transfección, se ven influidos por el tipo de plásmido utilizado además de por otros factores.

TIPO DE LINEA CELULAR: HepG2

• Las células HepG2 son fácilmente transfectables utilizando el agente de transfección Lipotransfectina.

TIPO DE AGENTE DE TRANSFECCION: LIPOTRANSFECTINA (1ml)

SIEMBRA DE CÉLULAS

• Siembre las células aproximadamente 24 horas antes de comenzar la transfección.
• La confluencia óptima para la transfección debe estar entre  un 50 % y un 60%(Confluencia visual 90%)

PREPARACIÓN DE LOS LIPOPLEXOS

• Mezclar 1.5-2 μg de DNA plasmídico en 50-100 μL de medio libre de suero o en PBS.
• Mezclar 0.5-4.5 μL de Lipotransfectina en 50-100 μLl de medio libre de suero o PBS.
• Incorporar la solución con el DNA a la solución que contiene la Lipotransfectina (es muy importante hacerlo de esta forma).
• Mezclar bien resuspendiendo con la micropipeta una única vez.
• Incubar la solución a temperatura ambiente: 15 a 20 minutos.

TRANSFECCIÓN

• Incorporar lo antes posible la solución con los lipoplexos, por goteo, a las células y mezclar el contenido con mucho cuidado, puede utilizar el “vortex” a la mínima velocidad.
• Incubar las células por un periodo de entre 24 y 48 horas a una temperatura de 37ºC.
• Refrescar el medio de 4 a 6 horas después de haber añadido la solución de lipoplexos puede ser positivo para obtener una mejor eficiencia de transfección en algunos casos.

A medida que vayamos haciendo más pruebas con otras líneas celulares iremos añadiendo protocolos. Esperamos que os haya sido útil.

¿Qué otras líneas celulares quereis que probemos? ¿Llevais acabo ya algún protocolo especial de transfección? ¡Vuestros comentarios nos encantan y nos hacen mejorar!

Agente de transfección: LIPOTRANSFECTIN